Comienzo del semestre-27 de enero

Este semestre planeamos construir los componentes del final de mi proyecto: el origen de replicacion de LuIII, junto con la ligacion del gen de GFP. Ya sabemos que enzimas requerimos para extraer el gen de vinculina, lo cual son las enzimas EcoRI y SlaI. Extraemos eso, mientras llegan las enzimas para sacar el origen de replicacion de LuIII.  Otra meta de este semestre es determinar los tiempos de incubacion a la cual la transfeccion en HeLa sera mas eficiente. Finalmente, la ultima meta es poder evitar un problema que pueda surgir por esta transfeccion: el virus morira primero o el huesped? Tenemos que evitar que el primero ocurra porque podra afectar grandemente nuestros resultados. Si hubiera mas tiempo, tambien nos interesa observar si hay alguna proteina estructural viral que podamos medir usando el GFP, ya que sabemos por la literatura, que LuIII debe tener un mecanismo de encapsidacion particular y seria bueno estudiarlo. Ahora, esto se investigaria si el tiempo amerita.

En resumen este semestre hare ligaciones para construir el plasmido con el ori de LuIII tagueado con el GFP, hare transfeccion en celulas HeLa y observare en un microscopio confocal lo que ocurre a diferentes tiempos. Esperamos que podamos contestar la pregunta que planteamos al principio del semestre anterior con resultados!

No aprendere ninguna tecnica nueva, ya yo he hecho ligaciones antes y la transfeccion es muy parecida a la transformacion excepto que una es en eucariotas y otras son en procariotas.

Bueno nos vemos en el Poster Day!